Sensitivity to antifungals by Candida spp samples isolated from cases of chronic atrophic candidiasis (CAC) / Sensibilidade a antifúngicos por amostras de Candida spp isoladas de casos de candidíase atrófica crônica (CAC)

Abstract The treatment of choice for chronic atrophic candidiasis (CAC), also known as denture stomatitis, is topical antifungal therapy. This study aimed to isolate, identify, and assess the antifungal susceptibility of Candida species from mucosal sites in denture wearers with a diagnosis of CAC and determine the prevalence of associated variables. The sample consisted of 44 patients wearing complete or partial dentures who had a clinical diagnosis of CAC. Using sterile cotton swabs, specimens were collected from the oral mucosa of all patients and grown at 30ºC for 48 h in CHROMagar Candida, as a means of isolating and screening the species. The complementary identification of the species was performed using the VITEK 2 automated system (BioMérieux), as well as the determination of their susceptibility to antifungal agents. Data were analyzed using the chi-square test. STATA 13.1 was used for statistical analysis (α = 5%). Of 44 patients with CAC, 33 (75%) had lesions classified as Newton type II. Yeasts were isolated in 38 cases. The most prevalent species was Candida albicans. None of the isolates were resistant to the antifungals tested. Our findings suggest that current indications for antifungal agents are appropriate. Also, antifungal susceptibility testing and proper fungal identification can help dentists to determine the optimal course of treatment for CAC.

Resumo O tratamento de escolha para candidíase atrófica crônica (CAC), também conhecida como estomatite protética, é a terapia antifúngica tópica. Este estudo teve como objetivo isolar, identificar e avaliar a susceptibilidade antifúngica de espécies de Candida de locais mucosos em portadores de prótese com diagnóstico de CAC e determinar a prevalência de variáveis associadas. A amostra consistiu em 44 pacientes portadores de próteses completas ou parciais que tiveram um diagnóstico clínico de CAC. Usando swab estéril, foram coletados espécimes da mucosa oral de todos os pacientes e cultivados a 30ºC durante 48 h em CHROMagar Candida, como forma de isolamento e triagem das espécies. A identificação complementar das espécies foi realizada no sistema automatizado VITEK 2 (BioMérieux), bem como a determinação da susceptibilidade delas a agentes antifúngicos. Os dados foram analisados usando o teste do qui-quadrado. O STATA 13.1 foi utilizado para análise estatística (α = 5%). Dos 44 pacientes com CAC, 33 (75%) apresentaram lesões classificadas como Newton tipo II. As leveduras foram isoladas em 38 casos. A espécie mais prevalente foi Candida albicans. Nenhum dos isolados foi resistente aos antifúngicos testados. Nossas descobertas sugerem que as indicações atuais para os agentes antifúngicos são apropriadas. Além disso, testes de susceptibilidade antifúngicos e identificação fúngica adequada podem ajudar os dentistas a determinar o curso ótimo de tratamento para CAC.

Biochemical identification techniques and antibiotic susceptibility profile of lipolytic ambiental bacteria from effluents / Técnicas de identificação bioquímica e perfil de suscetibilidade antibiótica de bactérias ambientais lipolíticas de efluentes

Abstract Different methodologies have been developed throughout the years to identify environmental microorganisms to improve bioremediation techniques, determine susceptibility profiles of bacteria in contaminated environments, and reduce the impact of microorganisms in ecosystems. Two methods of bacterial biochemical identification are compared and the susceptibility profile of bacteria, isolated from residential and industrial wastewater, is determined. Twenty-four bacteria were retrieved from the bacteria bank of the Environmental Microbiology Laboratory at the Institute of Biology (IB) of the Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, Brazil. Bacteria were identified by conventional biochemical tests and by the VITEK ®2 automated system. Further, the susceptibility profile to antibiotics was also determined by the automated system. Six species of bacteria (Raoutella planticola, K. pneumoniae ssp. pneumoniae , Serratia marcescens, Raoutella sp., E. cloacae and Klebsiella oxytoca) were identified by conventional biochemical tests, while three species of bacteria (K. pneumoniae ssp. pneumoniae, S. marcescens and K. oxytoca ) were identified by VITEK®2 automated system. VITEK ®2 indicated agreement in 19 (79.17%) isolates and difference in five (20.83%) isolates when compared to results from conventional biochemical tests. Further, antibiotic susceptibility profile results showed that all isolates (100%) were resistant to at least one out of the 18 antibiotics tested by VITEK®2. Thus, no multi-resistant bacteria that may be used in effluent treatment systems or in bioremediation processes have been reported. Results indicate VITEK ® 2 automated system as a potential methodology in the determination of susceptibility profile and identification of environmental bacteria.

Resumo Diferentes metodologias foram desenvolvidas ao longo dos anos para identificar microrganismos ambientais para melhorar as técnicas de biorremediação, determinar perfis de suscetibilidade de bactérias em ambientes contaminados e reduzir o impacto de microrganismos nos ecossistemas. Dois métodos de identificação bioquímica bacteriana são comparados e o perfil de susceptibilidade de bactérias, isoladas de efluentes residenciais e industriais, é determinado. Vinte e quatro bactérias foram coletadas do banco de bactérias do Laboratório de Microbiologia Ambiental do Instituto de Biologia (IB) da Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, Brasil. As bactérias foram identificadas por testes bioquímicos convencionais e pelo sistema automatizado VITEK®2. Além disso, o perfil de suscetibilidade aos antibióticos também foi determinado pelo sistema automatizado. Seis espécies de bactérias (Raoutella planticola , K. pneumoniae ssp. pneumoniae, Serratia marcescens, Raoutella sp., E. cloacae e Klebsiella oxytoca) foram identificadas por testes bioquímicos convencionais, enquanto três espécies de bactérias (K. pneumoniae ssp. pneumoniae, S. marcescens e K. oxytoca) foram identificados pelo sistema automatizado VITEK®2. VITEK®2 indicou concordância em 19 (79,17%) isolados e diferença em cinco (20,83%) isolados quando comparados aos resultados de testes bioquímicos convencionais. Além disso, os resultados do perfil de suscetibilidade aos antibióticos mostraram que todos os isolados (100%) foram resistentes a pelo menos um dos 18 antibióticos testados pelo VITEK®2. Assim, não foram relatadas bactérias multirresistentes que possam ser usadas em sistemas de tratamento de efluentes ou em processos de biorremediação. Os resultados indicam que o sistema automatizado VITEK ® 2 é uma metodologia potencial na determinação do perfil de suscetibilidade e identificação de bactérias ambientais.

Chemical composition of essential oils from the apiaceae family, cytotoxicity, and their antifungal activity in vitro against candida species from oral cavity / Composição química de óleos essenciais da família apiaceae, citotoxicidade e sua atividade antifúngica in vitro contra espécies de candida da cavidade oral

Abstract The aims of this research were: evaluate the chemical composition and the cytotoxicity of the Cuminum cyminum (cumin), Anethum graveolens (dill), Pimpinella anisum (anise) and Foeniculum vulgare (fennel) essential oils, as well as their antifungal activity in vitro against ten Candida spp. isolates. The chemical composition of the oils was analyzed by means of gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC/MS). The cytotoxicity assays were performed, using the cell proliferation reagent WST-1 in L929 mouse fibroblasts (20x103 well-1). The determinate the Minimum Inhibitory Concentration (MIC), was performed through the Broth Microdilution technique (CLSI). The chemical main components were the cuminaldehyde (32.66%) for cumin, carvone (34.89%) for the dill, trans-anethole (94.01%) for the anise and anethole (79.62%) for the fennel. Anise and fennel did not were cytotoxic in all the tested concentrations, however the cumin oil was cytotoxic in the concentration of 20 mg.mL-1 and the dill in the concentrations of 20 and 8 mg.mL-1. All yeasts were susceptible against the evaluated essential oils. Cumin presented the lowest MIC against yeasts. We concluded that all the essential oils presented inhibitory action against Candida spp., and C . cyminum, P. anisum and F. vulgare were not cytotoxic in the same minimum inhibitory concentrations for the fungi.

Resumo Os objetivos desta pesquisa foram: avaliar a composição química e a citotoxicidade dos óleos essenciais de Cuminum cyminum (cominho), Anethum graveolens (endro), Pimpinella anisum (erva-doce) e Foeniculum vulgare (funcho), bem como sua atividade antifúngica in vitro contra dez isolados de Candida spp.. A composição química dos óleos foi analisada por meio de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC / MS). Os ensaios de citotoxicidade foram realizados, utilizando o reagente de proliferação celular WST-1 em fibroblastos de ratinho L929 (20x103 poço-1). A determinação da Concentração Inibitória Mínima (MIC) foi realizada através da técnica de microdiluição em caldo (CLSI). Os principais componentes químicos foram o cuminaldeído (32.66%) para cominho, carvona (34.89%) para o endro, trans-anetol (94.01%) para erva-doce e anetol (79.62%) para a funcho. O endro e a erva-doce não foram citotóxicos em todas as concentrações testadas, no entanto, o óleo de cominho foi citotóxico na concentração de 20 mg.mL-1 e o endro nas concentrações de 20 e 8 mg.mL-1. Todas as leveduras foram suscetíveis aos óleos essenciais avaliados. O cominho apresentou a menor CIM contra as leveduras. Concluímos que todos os óleos essenciais apresentaram ação inibidora contra Candida spp., e C. cyminum, P. anisum e F. vulgare não foram citotóxicos nas mesmas concentrações inibitórias mínimas para os fungos.

Identification and antimicrobial suceptibility profile of bacteria causing bovine mastitis from dairy farms in Pelotas, Rio Grande do Sul / Identificação e perfil de suscetibilidade antimicrobiana de bactérias causadoras de mastite bovina em propriedades leiteiras de Pelotas, Rio Grande do Sul

Abstract Mastitis is an inflammatory process of the udder tissue caused mainly by the bacteria Staphylococcus aureus. The indiscriminate use of antibiotics fosters conditions that favor the selection of resistant microorganisms, suppressing at the same time susceptible forms, causing a serious problem in dairy cattle. Given the importance in performing an antibiogram to select the most adequate antimicrobial therapy, the aim of this study was to identify bacteria isolated from cow's milk with mastitis, in dairy farms situated in the city of Pelotas, Rio Grande do Sul, and to determinate the susceptibility profile of these isolates against the antibiotics used to treat this illness. A total of 30 isolates of Staphylococcus spp., were selected from milk samples from the udder quarters with subclinical mastitis whose species were identified through the Vitek system. The susceptibility profile was performed by the disk diffusion assay, against: ampicillin, amoxicillin, bacitracin, cephalexin, ceftiofur, enrofloxacin, gentamicin, neomycin, norfloxacin, penicillin G, tetracycline and trimethoprim. In the antibiogram, 100.0% of the isolates were resistant to trimethoprim and 96.7% to tetracycline and neomycin, three strains of Staphylococcus spp., (10.0%) presented resistance to the 12 antibiotics tested and 24 (80.0%) to at least eight. These results showed the difficulty in treating mastitis, due to the pathogens' resistance.

Resumo A mastite se constitui no processo inflamatório da glândula mamária causada principalmente por bactérias Staphylococcus aureus. O uso indiscriminado dos antibióticos promove condições que favorecem a seleção de micro-organismos resistentes e, ao mesmo tempo, suprime formas suscetíveis, causando um grave problema para a bovinocultura leiteira. Tendo em vista a importância da realização do antibiograma para a seleção da terapia antimicrobiana mais adequada, o objetivo deste estudo foi identificar bactérias isoladas de leite de vaca com mastite, oriundas de propriedades leiteiras localizadas na cidade de Pelotas, RS, bem como determinar o perfil de suscetibilidade desses isolados frente a antibióticos usados para o tratamento desta doença. Foram selecionados 30 isolados de Staphylococcus spp. de amostras de leite provenientes de quartos mamários com mastite subclínica, cujas espécies foram identificadas através do sistema Vitek. O perfil de suscetibilidade foi realizado pela técnica de difusão em disco, frente a: ampicilina, amoxicilina, bacitracina, cefalexina, ceftiofur, enrofloxacina, gentamicina, neomicina, norfloxacina, penicilina G, tetraciclina e trimetoprima. No antibiograma, 100,0% dos isolados foram resistentes a trimetoprima e 96,7% a tetraciclina e a neomicina, três cepas (10,0%) foram resistentes aos 12 antibióticos testados e 24 (80,0%) a pelo menos oito. Esses resultados demonstram a dificuldade encontrada no tratamento da mastite devido à resistência dos agentes patológicos.

Evaluation of the frequency of Candida spp. in hospitalized and non-hospitalized subjects / Avaliação da frequência de candida spp. em indivíduos hospitalizados e não hospitalizados

Abstract The aim of this study was to evaluate the frequency of Candida species between a non-hospitalized and a hospitalized population. For this purpose, samples of saliva were sampled through sterile swabs, moistened in peptone water and rubbed in the oral cavity of 140 individuals, from which, 70 were hospitalized patients from the Medical Clinic of a Teaching Hospital and the other 70 were non-hospitalized subjects. All saliva samples were plated in Sabouraud Dextrose agar added with Chloramphenicol and incubated at 36 °C for 48 hours. The morphology identification was performed through macroscopic and microscopic characterization, the CHROMagar Candida medium and the VITEK® system Yeast Biochemical Card (bio Mérieux SA, France). The results showed a colonization of Candida spp. in 85.7% the hospitalized individuals, where the species found were C. albicans (60%), C. tropicalis (23.4%), C. krusei (3.3%) and Candida spp. (13.3%). In the non-hospitalized individuals the colonization by Candida spp was 47.1%, and the species found were: C. albicans (45.5%), C.krusei (9.1%), C. guilliermondii (9.1% %), C. tropicalis (3.0%), C. famata (3.0%) and Candida spp. (30.3%). In spite of their presence in oral cavity in both groups, Candida spp. was more frequently isolated in hospitalized individuals, who were 6.73 times more likely to have this fungus in the oral cavity and were 3.88 times more likely to have Candida albicans.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a frequência de espécies de Candida entre uma população de indivíduos não-hospitalizados e hospitalizados. Para isto, amostras de saliva foram coletadas através de swabs estéreis, umedecidas em água de peptona e friccionadas na cavidade bucal de 140 indivíduos, dos quais 70 eram pacientes internados em uma Clínica Médica de um Hospital Escola e os outros 70 eram indivíduos não hospitalizados sem contato com ambiente hospitalar. Todas as amostras de saliva foram plaqueadas em ágar Sabouraud dextrose adicionadas de cloranfenicol e incubadas a 36 °C durante 48 horas. A identificação morfológica foi realizada através da caracterização macroscópica e microscópica, com o meio CHROMagar Candida e do sistema VITEK® Biochemical Card (bio Mérieux SA, França). Os resultados mostraram uma colonização de Candida spp. em 85,7% dos indivíduos hospitalizados, onde as espécies encontradas foram: C.albicans (60%), C. tropicalis (23,4%), C. krusei (3,3%) e Candida spp. (13,3%). Nos indivíduos não-hospitalizados a colonização por Candida spp foi de 47,1%, e as espécies encontradas foram: C. albicans (45,5%), C. krusei (9,1%), C. guilliermondii (9,1%), C. tropicalis (3,0%), C. famata (3,0%) e Candida spp. (30,3%). Apesar de sua presença na cavidade oral em ambos os grupos, Candida spp. foi mais freqüentemente isolada em indivíduos hospitalizados, que foram 6,73 vezes mais propensos a ter este fungo na cavidade oral e foram 3,88 vezes mais propensos a ter Candida albicans.

Airborne fungi in an intensive care unit / Fungos anemófilos em uma unidade de terapia intensiva

Abstract The presence of airborne fungi in Intensive Care Unit (ICUs) is associated with increased nosocomial infections. The aim of this study was the isolation and identification of airborne fungi presented in an ICU from the University Hospital of Pelotas - RS, with the attempt to know the place's environmental microbiota. 40 Petri plates with Sabouraud Dextrose Agar were exposed to an environment of an ICU, where samples were collected in strategic places during morning and afternoon periods for ten days. Seven fungi genera were identified: Penicillium spp. (15.18%), genus with the higher frequency, followed by Aspergillus spp., Cladosporium spp., Fusarium spp., Paecelomyces spp., Curvularia spp., Alternaria spp., Zygomycetes and sterile mycelium. The most predominant fungi genus were Aspergillus spp. (13.92%) in the morning and Cladosporium spp. (13.92%) in the afternoon. Due to their involvement in different diseases, the identified fungi genera can be classified as potential pathogens of inpatients. These results reinforce the need of monitoring the environmental microorganisms with high frequency and efficiently in health institutions.

Resumo A presença de fungos anemófilos nas UTIs está associada com o aumento de infecções nosocomiais. O objetivo deste estudo foi isolar e identificar quais os principais fungos anemófilos presentes em uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de um Hospital Universitário de Pelotas - RS, na tentativa de conhecer a microbiota ambiental do local. Através de 40 placas de Petri com Agar Sabouraud dextrose expostas no ambiente de UTI foram coletadas amostras por exposição em locais estratégicos durante períodos da manhã e tarde por dez dias. Sete gêneros fúngicos foram identificados: Penicillium spp. (15,18%), o gênero de maior frequência, seguido de Aspergillus spp., Cladosporium spp., Fusarium spp., Paecelomyces spp., Curvularia spp., Alternaria spp., além de Zigomicetos e micélios estéreis. Houve predomínio de Aspergillus spp. (13,92%) pela manhã e Cladosporium spp. (13,92%) a tarde. Por estarem envolvidos em diferentes enfermidades, os gêneros identificados podem ser classificados como patógenos em potencial aos pacientes internados. Estes resultados reforçam a necessidade de um monitoramento dos micro-organismos ambientais com maior freqüência e eficiência nas instituições de saúde.

Antifungal susceptibility profile of diferent yeasts isolates from wild animals, cow's milk with subclinical mastitis and hospital environment / Perfil de suscetibilidade antifúngica de diferentes leveduras isoladas da microbiota de animais silvestres, leite com mastite subclínica e ambiente hospitalar

Abstract Yeast infections have acquired great importance due to increasing frequency in immunocompromised patients or patients undergoing invasive diagnostic and therapeutic techniques, and also because of its high morbidity and mortality. At the same time, it has been seen an increase in the emergence of new pathogenic species difficult to diagnose and treat. The aim of this study was to determine the in vitro susceptibility of 89 yeasts from different sources against the antifungals amphotericin B, voriconazole, fluconazole and flucytosine, using the VITEK® 2 Compact system. The antifungal susceptibility was performed automatically by the Vitek® 2 Compact system. The origin of the yeasts was: Group 1 - microbiota of wild animals (W) (26/89), 2 - cow's milk with subclinical mastitis (M) (27/89) and 3 - hospital enviorment (H) (36/89). Of the 89 yeasts submitted to the Vitek® 2 test, 25 (20.9%) were resistant to fluconazole, 11 (12.36%) to amphotericin B, 3 (3.37%) to voriconazole, and no sample was resistant to flucytosine. Regarding the minimum inhibitory concentration (MIC), fluconazole showed an MIC between 1 and 64 mg/mL for the three groups, voriconazole had an MIC between 0.12 and 8 mg/mL, amphotericin B had an MIC between 0.25 and 4 mg/mL for group H and group W respectively, between 0.25 and 16 mg/mL for group M and flucytosine had an MIC equal to 1μg/mL for all groups. The yeasts isolated from the H group showed the highest resistance to fluconazole 12/89 (13.49%), followed by group W (7.87%) and group M (5.62%). The more resistant group to voriconazole was followed by the M and H groups, the W group showed no resistance to this antifungal. Group H was the least resistant (2.25%) to amphotericin.

Resumo As infecções por leveduras têm adquirido grande importância, devido ao aumento da sua frequência em pacientes imunocomprometidos ou pacientes submetidos a técnicas diagnosticas e terapêuticas agressivas, e devido sua alta morbidade e mortalidade. Paralelamente tem-se observado um incremento na aparição de novas espécies patógenas difíceis de diagnosticar e tratar. O objetivo desse estudo foi avaliar a suscetibilidade in vitro de 89 leveduras de diferentes origens frente aos antifúngicos Anfotericina B, Voriconazol, Fluconazol e Fluocitocina pelo Sistema Vitek® 2. O antifungigrama foi realizado automaticamente pelo Vitek® 2 Compact. A origem das leveduras foi: Grupo 1- Microbiota de Animais Silvestres (S) (26/89), 2- Leite com mastite bovina subclínica (L) (27/89) e 3- Ambiente Hospitalar (H) (36/89). Das 89 leveduras submetidas à carta Vitek®, 25 (20.09%) foram resistentes ao fluconazol, oito (8.99%) à anfotericina B, três (3.37%) ao voriconazol, e nenhuma amostra mostrou-se resistente a fluocitosina. O grupo três (H) foi mais resistente ao fluconazol que os demais, já o dois (L) foi mais resistente ao voriconazol e a anfotericina B que os outros dois. O fluconazol pode ter apresentado maior número de resistências devido ser um fármaco comumente usado principalmente em humanos. As leveduras isoladas de humanos apresentaram maior número de resistências aos fármacos testados do que as leveduras isoladas de animais silvestres. O que pode ocorrer devido a uma maior exposição dos humanos aos fármacos em relação aos animais que vivem isolados em ambientes selvagens e na maioria dos casos nunca teve contato com fármacos de qualquer origem.

In vitro susceptibility of nematophagous fungi to antiparasitic drugs: interactions and implications for biological control / Suscetibilidade in vitro de fungos nematófagos à antiparasitários: interações e implicações para o controle biológico

Abstract The fast anthelmintic resistance development has shown a limited efficiency in the control of animal's endoparasitosis and has promoted research using alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density in farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans and Paecilomyces lilacinus against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin, levamisole and closantel by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4.0 and 0.031 µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0.937 and 0.117 µg/mL for levamisole, and between 0.625 and 0.034 µg/mL for closantel. The results showed that all antiparasitic drugs had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, which could compromise their action as agents of biological control. D. flagrans was the most susceptible species to all drugs.

Resumo O desenvolvimento rápido da resistência anti-helmíntica demonstrou a eficiência limitada no controle de endoparasitoses em animais, e promoveu a investigação em métodos de controles alternativos. O uso de produtos químicos no tratamento anti-helmíntico animal, em associação com fungos nematófagos utilizados para o controlo biológico, é uma estratégia que tem provado ser eficaz na redução da densidade da população de nematódeos em animais agrícolas. Este estudo teve como objetivo verificar a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans e Paecilomyces lilacinus frente aos antiparasitários albendazol, tiabendazol, ivermectina, levamisol e closantel, usando a concentração inibitória mínima (MIC). Os MICs variaram entre 4,0 e 0,031 μg/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, entre 0,937 e 0,117 μg/mL para o levamisol, e entre 0,625 e 0,034 μg/mL para closantel. Os resultados mostraram que todos os antiparasitários tiveram um efeito inibidor in vitro sobre os fungos nematófagos, o que poderia comprometer suas atividades como agentes de controle biológico. D. flagrans foi a espécie mais sensível a todas as drogas.

Biochemical identification techniques and antibiotic susceptibility profile of lipolytic ambiental bacteria from effluents

Abstract Different methodologies have been developed throughout the years to identify environmental microorganisms to improve bioremediation techniques, determine susceptibility profiles of bacteria in contaminated environments, and reduce the impact of microorganisms in ecosystems. Two methods of bacterial biochemical identification are compared and the susceptibility profile of bacteria, isolated from residential and industrial wastewater, is determined. Twenty-four bacteria were retrieved from the bacteria bank of the Environmental Microbiology Laboratory at the Institute of Biology (IB) of the Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, Brazil. Bacteria were identified by conventional biochemical tests and by the VITEK ®2 automated system. Further, the susceptibility profile to antibiotics was also determined by the automated system. Six species of bacteria (Raoutella planticola, K. pneumoniae ssp. pneumoniae , Serratia marcescens, Raoutella sp., E. cloacae and Klebsiella oxytoca) were identified by conventional biochemical tests, while three species of bacteria (K. pneumoniae ssp. pneumoniae, S. marcescens and K. oxytoca ) were identified by VITEK®2 automated system. VITEK ®2 indicated agreement in 19 (79.17%) isolates and difference in five (20.83%) isolates when compared to results from conventional biochemical tests. Further, antibiotic susceptibility profile results showed that all isolates (100%) were resistant to at least one out of the 18 antibiotics tested by VITEK®2. Thus, no multi-resistant bacteria that may be used in effluent treatment systems or in bioremediation processes have been reported. Results indicate VITEK ® 2 automated system as a potential methodology in the determination of susceptibility profile and identification of environmental bacteria.

Resumo Diferentes metodologias foram desenvolvidas ao longo dos anos para identificar microrganismos ambientais para melhorar as técnicas de biorremediação, determinar perfis de suscetibilidade de bactérias em ambientes contaminados e reduzir o impacto de microrganismos nos ecossistemas. Dois métodos de identificação bioquímica bacteriana são comparados e o perfil de susceptibilidade de bactérias, isoladas de efluentes residenciais e industriais, é determinado. Vinte e quatro bactérias foram coletadas do banco de bactérias do Laboratório de Microbiologia Ambiental do Instituto de Biologia (IB) da Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, Brasil. As bactérias foram identificadas por testes bioquímicos convencionais e pelo sistema automatizado VITEK®2. Além disso, o perfil de suscetibilidade aos antibióticos também foi determinado pelo sistema automatizado. Seis espécies de bactérias (Raoutella planticola , K. pneumoniae ssp. pneumoniae, Serratia marcescens, Raoutella sp., E. cloacae e Klebsiella oxytoca) foram identificadas por testes bioquímicos convencionais, enquanto três espécies de bactérias (K. pneumoniae ssp. pneumoniae, S. marcescens e K. oxytoca) foram identificados pelo sistema automatizado VITEK®2. VITEK®2 indicou concordância em 19 (79,17%) isolados e diferença em cinco (20,83%) isolados quando comparados aos resultados de testes bioquímicos convencionais. Além disso, os resultados do perfil de suscetibilidade aos antibióticos mostraram que todos os isolados (100%) foram resistentes a pelo menos um dos 18 antibióticos testados pelo VITEK®2. Assim, não foram relatadas bactérias multirresistentes que possam ser usadas em sistemas de tratamento de efluentes ou em processos de biorremediação. Os resultados indicam que o sistema automatizado VITEK ® 2 é uma metodologia potencial na determinação do perfil de suscetibilidade e identificação de bactérias ambientais.

Sensitivity to antifungals by Candida spp samples isolated from cases of chronic atrophic candidiasis (CAC)

Abstract The treatment of choice for chronic atrophic candidiasis (CAC), also known as denture stomatitis, is topical antifungal therapy. This study aimed to isolate, identify, and assess the antifungal susceptibility of Candida species from mucosal sites in denture wearers with a diagnosis of CAC and determine the prevalence of associated variables. The sample consisted of 44 patients wearing complete or partial dentures who had a clinical diagnosis of CAC. Using sterile cotton swabs, specimens were collected from the oral mucosa of all patients and grown at 30ºC for 48 h in CHROMagar Candida, as a means of isolating and screening the species. The complementary identification of the species was performed using the VITEK 2 automated system (BioMérieux), as well as the determination of their susceptibility to antifungal agents. Data were analyzed using the chi-square test. STATA 13.1 was used for statistical analysis ( = 5%). Of 44 patients with CAC, 33 (75%) had lesions classified as Newton type II. Yeasts were isolated in 38 cases. The most prevalent species was Candida albicans. None of the isolates were resistant to the antifungals tested. Our findings suggest that current indications for antifungal agents are appropriate. Also, antifungal susceptibility testing and proper fungal identification can help dentists to determine the optimal course of treatment for CAC.

Resumo O tratamento de escolha para candidíase atrófica crônica (CAC), também conhecida como estomatite protética, é a terapia antifúngica tópica. Este estudo teve como objetivo isolar, identificar e avaliar a susceptibilidade antifúngica de espécies de Candida de locais mucosos em portadores de prótese com diagnóstico de CAC e determinar a prevalência de variáveis associadas. A amostra consistiu em 44 pacientes portadores de próteses completas ou parciais que tiveram um diagnóstico clínico de CAC. Usando swab estéril, foram coletados espécimes da mucosa oral de todos os pacientes e cultivados a 30ºC durante 48 h em CHROMagar Candida, como forma de isolamento e triagem das espécies. A identificação complementar das espécies foi realizada no sistema automatizado VITEK 2 (BioMérieux), bem como a determinação da susceptibilidade delas a agentes antifúngicos. Os dados foram analisados usando o teste do qui-quadrado. O STATA 13.1 foi utilizado para análise estatística ( = 5%). Dos 44 pacientes com CAC, 33 (75%) apresentaram lesões classificadas como Newton tipo II. As leveduras foram isoladas em 38 casos. A espécie mais prevalente foi Candida albicans. Nenhum dos isolados foi resistente aos antifúngicos testados. Nossas descobertas sugerem que as indicações atuais para os agentes antifúngicos são apropriadas. Além disso, testes de susceptibilidade antifúngicos e identificação fúngica adequada podem ajudar os dentistas a determinar o curso ótimo de tratamento para CAC.

Antiparasitic drugs: in vitro tests against nematophagous fungi / Antiparasitários: teste in vitro contra fungos nematófagos

Abstract The use of biological agents has been intensified in recent years against eggs and larvae of gastrointestinal nematodes as an alternative control method in pasture plant health management, with the concomitant use with antiparasitic drugs still occurring. The aim of this study was to test the in vitro activity of the following antiparasitic drugs: Ivermectin and albendazole against the following nematophagous fungi: Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus and Paecilomyces variotii. The agar diffusion test was performed using an initial concentration of 0.0016g/mL of each drug, after solidification of the culture medium containing the drug concentration each nematophagous fungi was inoculated. The results showed that in a concentration of 80μg/mL, the fungal growth decreased, however, with the concentration of 160μg/mL, there was no fungal growth in both drugs, compared to the control, which indicates an inhibition in the development of the nematophagous fungi studied when they come in contact with ivermectin and albendazole.

Resumo O uso de agentes biológicos que atuam em ovos e larvas de nematódeos gastrintestinais como uma alternativa para o manejo de pastagens de saúde tem se intensificado nos últimos anos, bem como o uso concomitante com outros medicamentos antiparasitários. O objetivo deste estudo foi testar o efeito in vitro dos fármacos Ivermectina e Albendazol em fungos nematófagos Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus e Paecilomyces variotii. Foi utilizada a técnica de difusão em agar, sendo preparado a partir de uma concentração inicial de 0,0016g/mL de cada uma das drogas e diluídas em meio de cultura, com posterior semeadura dos fungos nematófagos. Os resultados mostraram que na concentração de 80μg/mL, o crescimento diminuiu, no entanto, com a concentração de 160μg/mL de ambas as drogas, não houve crescimento de fungos durante o período de estudo, em comparação com o controle, indicando a inibição do desenvolvimento dos fungos nematófagos estudados quando em contato com a Ivermectina e Albendazol.

Atividade inibitória do óleo essencial de orégano em fungos de importância médica e veterinária / Inhibitory activity of origanum essential oil against important fungus in veterinary

The in vitro activity of Origanum vulgare essential oil against fungal isolates was evaluated. A total of 27 clinical isolates were used, including: C. albicans, S. schenckii, M. pachydermatis, Aspergillus flavus, and A. fumigatus. Microdilution in broth technique (NCCLS M27-A2 and M-38) was used and susceptibility was expressed as Minimum Inhibitory Concentration (MIC). Essential oil was obtained by hydrodistillation in Clevenger and analyzed by gas chromatography, showing the presence of 4-terpineol, alpha-terpineol, 4-terpinene, thymol and carvacrol, as the main compounds. Origanum oil MIC for C. albicans varied from 125 to 500mL/mL; for S. schenckii, from 250 to 500mL/mL; for M. pachydermatis, from 15 to 30mL/mL; and for Aspergillus, from 30 to 60mL/mL. Isolates sensitivity showed to the origanum oil stimulates the accomplishment of new studies, including in vivo tests, contributing to the search of alternative treatments to mycosis.

Atividade antifúngica do extrato aquoso de Arctium minus (Hill) Bernh. (Asteraceae) sobre espécies orais de Candida / Antifungal activity of the aqueous extract from Arctium minus (Hill) Bernh. (Asteraceae) on oral Candida species

Este estudo teve como objetivo avaliar a atividade antifúngica do extrato aquoso de folhas de "bardana" [Arctium minus (Hill) Bernh.], por meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) sobre diferentes espécies e linhagens do gênero Candida. Foram incluídas no trabalho as espécies de Candida albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. stellatoidea, C. dubliniensis e C. krusei. Utilizaram-se quatro linhagens de C. albicans e três de C.tropicalis, enquanto que para as demais espécies, apenas uma linhagem foi testada. Estas leveduras foram utilizadas no estudo devido à importância e frequência na cavidade bucal. As leveduras foram submetidas a tratamentos com concentrações do extrato aquoso que variaram de 0,09 a 25 mg mL-1. Os resultados indicaram que concentrações inferiores a 12,5 mg mL-1 não são suficientes para apresentar efeito fungistático ou fungicida. A concentração de 12,5 mg mL-1 apresentou efeito fungistático sobre a maioria das linhagens e espécies testadas (C. albicans 04A e ATCC44858; C. tropicalis 23600 e 23651; C. glabrata; C. stellatoideia; C. dubliniensis e C. krusei). Entretanto, efeito fungicida foi observado apenas sobre a espécie C. krusei (CFM=12,5 mg mL-1). Comportamento diferenciado foi observado entre diferentes linhagens de uma espécie (para C. albicans e C. tropicalis). Assim, a ação antifúngica do extrato aquoso de A. minus (Hill) Bernh. provavelmente está associada à variabilidade genética existente entre as diferentes linhagens de uma mesma espécie e das diferentes espécies, sendo que concentrações inferiores a 12,5 mg mL-1 não apresentaram efeito sobre as leveduras testadas. Com base na metodologia empregada e dentro das limitações deste estudo, conclui-se que o extrato aquoso de A. minus revelou efeito antifúngico, principalmente fungistático, contra espécies de Candida orais. Porém, novos estudos são necessários para avaliar o seu real potencial antifúngico dentro do meio bucal.

This study aimed to evaluate the antifungal activity of the aqueous extract from leaves of burdock [Arctium minus (Hill) Bernh.] by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Fungicidal Concentration (MFC) on different species and strains of Candida genus. The species Candida albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. stellatoidea, C. dubliniensis, and C. Krusei were included in this study. Four C. albicans and three C. tropicalis strains were used, whereas only one strain of each remaining species was tested. Such yeasts were used in this study due to their importance and frequency in the oral cavity. The yeasts were subjected to treatments with aqueous extract concentrations that ranged from 0.09 to 25 mg mL-1. Concentrations lower than 12.5 mg mL-1 were not enough to present fungicidal or fungistatic effect. The concentration of 12.5 mg mL-1 had fungistatic effect on most tested strains and species (C. albicans 04A and ATCC44858; C. tropicalis 23600 and 23651; C. glabrata; C. stellatoideia; C. dubliniensis; and C. krusei). However, fungicidal effect was only observed on the species C. krusei (MFC=12.5 mg mL-1). A distinct performance was observed among different strains from the same species (for C. albicans and C. tropicalis). Thus, the antifungal action of A. minus (Hill) Bernh. aqueous extract is probably associated with the genetic variability present among the different strains of one same species and among different species; besides, concentrations lower than 12,5 mg mL-1 did not have an effect on the tested yeasts. The adopted methodology and considering the limitations of this study led to the conclusion that the aqueous extract of A. minus presented antifungal effect, mainly fungistatic, against oral Candida species. However, new studies are needed to evaluate its real antifungal potential inside the oral environment.